本文標題："用于PCR反應的測試檢測用便攜光學(xué)顯微鏡"
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用于PCR反應的測試檢測用便攜光學(xué)顯微鏡
沉淀DNA的另一種方法是CTAB法。加1／]0體積的5％CTAB，在冰上放置
20分鐘，DNA／CTAB在4~C 3000g下離心，去掉上清液，再用70％的乙醇和2
00mM醋酸鈉((pH6．0)溶解CTAB，溶液]0000g下離心20分鐘，重復上述抽提
過(guò)程兩次，然后用70％的乙醇沖洗去掉鹽分。沉淀經(jīng)過(guò)干燥(5分鐘)，溶于
1／10XⅧ緩沖液中(Murray&Thompson，1990)。必須注意的是，這些技術(shù)不
可能去除所有的雜質(zhì)，并且可能導致DNA丟失。建議研究者通過(guò)擴增反應判
斷DNA擴增是否被抑制以判斷是否有必要進(jìn)行第二次純化過(guò)程。29．2 PCR
擴土曾和DNA序歹Q測定
進(jìn)行基因片段的擴增反應時(shí)，古DNA會(huì )呈現出特殊的問(wèn)題，主要由于抑
制因子的存在和DNA模板的片段性(Golenberg，1991，1993)。除了這些限
制外，非常低的DNA濃度，引物的不協(xié)調性，非最佳的溫度條件和時(shí)間設置
等，能經(jīng)常導致陰性擴增結果。盡管陰性擴增結果常常與缺少內源DNA的結
果一致，但決不能表明樣品中沒(méi)有DNA存在。因此，在定論提取物中完全沒(méi)
有DNA之前，必須進(jìn)行仔細的檢驗。抑制因子可以通過(guò)在陽(yáng)性控制體系中加
一些用于PCR反應的測試抽提液來(lái)檢測，在陽(yáng)性控制反應體系中反應產(chǎn)物是
否存在可以反映抑制效應存在與否，部分抑制物的存在會(huì )降低產(chǎn)物的量。
另外，由于樣品中高度片段化的DNA，在擴增反應中重疊的片段充當引物在
延伸過(guò)程中消耗dNTPs和酶的量，這種酶促反應將部分重建破損模板，從而
與目標PCR反應競爭而降低目標PCR的效率，導致低產(chǎn)量的特異PCR產(chǎn)物(
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