任何曾經(jīng)作過(guò)細胞培養的人,都會(huì )遇到與污染有關(guān)的問(wèn)題,污染的發(fā)源來(lái)自許多形式,它有可能是已感染的細胞,設備,藥劑,試管及由空氣傳播之細菌的結果,因為它可以在不利的環(huán)境下造成惡性循環(huán),基于重要性,追蹤可能的污染源有兩個(gè)范圍,包含:一個(gè)是細胞培養實(shí)驗室的準備工作,另一個(gè)是細胞培養處理的技術(shù)步驟。受污染的有機體一般有:細菌(bacteria),霉菌(fungi),酵母菌(yeasts),病毒(viruses),及霉漿體(mycoplasma)。通常,細菌污染透過(guò)與人直接接觸而發(fā)生,而霉菌污染極不易避免,一旦它們已經(jīng)污染實(shí)驗桌或培養箱,霉菌形如長(cháng)馬蹄狀及似綿羊毛狀的生長(cháng)是可以用肉眼看見(jiàn),霉菌通常透過(guò)空氣傳播,酵母菌也屬于霉菌類(lèi)。

 

而透過(guò)病毒來(lái)污染似乎較不常見(jiàn),原因可追溯于病毒對于超過(guò)37?C溫度的極敏感度。另一方面, 經(jīng)由霉漿體的細胞培養感染較常發(fā)生,它們持續較久及不易處理,然而,使用較先進(jìn)的方法,可以易于辨識它們。霉漿體異于細菌,因為,霉漿體分子更小,在0.22um至0.20um之間,沒(méi)有細胞壁及單細胞生殖,因為霉漿體感染時(shí)不常產(chǎn)生劇烈影響,即使,它在各種狀況下,入侵至受感染的細胞的metabolism內,它可維持長(cháng)時(shí)間不被發(fā)現。所以,霉漿體的感染源不易追蹤,因為,它會(huì )以新方式的  cell lines 引入實(shí)驗室,即使,這血清產(chǎn)品制造者保證免于受到霉漿體的感染,但是,事實(shí)上,污染之血清仍是較有可能的原因。胰蛋白也是感染源之一,因為胰蛋白是由豬的胰臟產(chǎn)生之酵素,但常用于細胞培養過(guò)程中,如:enzymic dissociation of cells,由動(dòng)物源感染的物質(zhì)是一種危害,尤其是霉漿體。霉漿體也來(lái)自實(shí)驗室人員的嘴巴及喉嚨地區。

 

 

感染的第二個(gè)基本風(fēng)險在于過(guò)程中使用的器具,特別是培養箱。毫無(wú)疑問(wèn)地,培養箱可以為感染的原始發(fā)生負起責任,因為,它經(jīng)常從外界被引入。雖然如此,因為要有良好的細胞培養之緣故,所以,必須將有效的保護機制放入操作中。故當評估各種培養箱系統時(shí),以下所有保護機制應該列入考慮,如清除培養箱內的滋生物方式中,最可靠有效的為:至少維持溫度180?C的加熱滅菌及經(jīng)常能夠把此當作必要條件。

 

 

在細胞成長(cháng)中很重要的，是藉由箱內的大量濕度容量，在二氧化碳培養箱維持等滲壓的滲透壓比例。在過(guò)程中，需確保對抗污染的防御力。在此方面特別重要的是乾爽的內墻、簡(jiǎn)單的清潔及可靠的滅菌?，F已采用的有兩道程續：箱內無(wú)控制的水箱系統或昂貴、可控制的外部潮濕系統。就兩道手續而言，各有其利處；故WTB Binder有利地將其結合成一全新開(kāi)發(fā)的系統。此新專(zhuān)利的Permadry系統是一具備可控制濕度釋放(可高達98%相對濕度)的可拆裝雙重水箱系統。此系統很可靠地可除去所有污染危險。

 

 

      培養箱對外最常見(jiàn)的污染途徑包含：排氣風(fēng)扇輪軸,來(lái)自外部濕度系統的

流入流出物,測量路徑埠,供氣設備;無(wú)疑地，在箱內的循環(huán)風(fēng)扇將被視為所謂的細菌彈弓(slingshot)，如此一來(lái)，在箱內中會(huì )發(fā)現空氣傳播的細菌。更進(jìn)一步來(lái)說(shuō)，絕對沒(méi)有外部濕度系統流出流入的聯(lián)結。因為在此便會(huì )產(chǎn)生最大的污染危險：由于溫度的不同，入口及出口處易產(chǎn)生凝結。而值得一提的是WTB Binder 二氧化碳培養箱的密閉系統，因唯一外部聯(lián)結即氣體入口，還是受fine filter的保護。此外，此密封系統亦有如下優(yōu)異處：極小的系統聯(lián)結，卻有著(zhù)極大的穩定度和極小的故障率。對使用者來(lái)說(shuō)是非常有親和性的。此一體成型(又稱(chēng)bath tub)，完全無(wú)縫之內槽有著(zhù)類(lèi)似盆狀圓弧邊緣；這是為何不可能會(huì )醞釀細菌的溫床，且無(wú)障礙的落實(shí)完整的清潔及消毒。

 

 

   其他方式包括人為的內部消毒,此方法僅在可觸碰到的地帶才有效果, WTB Binder在培養機制上呈現一種非常進(jìn)步的設計,采用bathtub原則,整個(gè)內部能夠簡(jiǎn)單地清理及清潔后,不會(huì )留下剩馀物,因為,整個(gè)器具,包括基座,可以有彈性地移動(dòng)。另一方面,有hot-air滅菌的裝置,所以,內部元件都不需更動(dòng),另一個(gè)在cell lines最大感染是由空氣傳播污染的方式,故將不要的濃縮物留在里面,造成細胞感染。